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Ensaios sorológicos medindo a resposta de anticorpos

Ensaios sorológicos medindo a resposta de anticorpos


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Dado que uma resposta imune apropriada a uma bactéria pode ser impedida em um indivíduo, incluindo a não produção de todos os anticorpos que são conhecidos por ocorrerem em pessoas que foram infectadas, ou a produção de quantidades insuficientes de anticorpos específicos para uma bactéria --- São todos testes sorológicos usando anticorpos como base para a detecção de uma infecção sistêmica inerentemente defeituosa? Neste caso, estou assumindo a aplicação adequada de um teste e metodologia de laboratório competente. Mas, igualmente importante, quais critérios podem ser usados ​​rotineiramente para considerar a eficácia de um teste de anticorpo específico, em toda a linha.


Os anticorpos usados ​​para testes sorológicos são realizados in vitro e não precisam ser eficazes para eliminar o patógeno. Para um indivíduo infectado, os anticorpos podem desempenhar um papel na neutralização, opsonização ou ativação do sistema complemento (verifique a Imunobiologia de Janeway para mais detalhes). Existem várias razões pelas quais os anticorpos podem estar presentes e não desencadear uma resposta eficaz por essas vias.

Por exemplo, E. Coli O157: H7 produz toxina Shiga e existem imunoensaios para testar a presença da toxina nas fezes (1). Apenas pequenas quantidades da toxina são necessárias para causar doenças. Anticorpos contra a toxina foram observados em indivíduos com a doença, sugerindo que a toxina não é um desafio forte o suficiente para uma resposta imune Discussão de (2).

Você poderia ir caso a caso para cada um dos imunoensaios e ver por que seus alvos são difíceis de transformar em terapêuticas.


Todos os testes sorológicos que usam anticorpos como base para a detecção de uma infecção sistêmica são inerentemente falhos?

Não

Todo teste diagnóstico deve ser interpretado no contexto das características clínicas de um indivíduo e de acordo com os dados sobre aquele teste específico. Os testes de soro para anticorpos não são diferentes. Veja os capítulos 8 e 9 da Cecil Medicine para uma discussão sobre isso. Uma passagem chave:

A maioria dos testes não fornece uma resposta definitiva sobre o diagnóstico ou prognóstico, mas reduz a incerteza

Exceto em casos de imunização passiva (por exemplo, IVIG transfundido), a presença de um anticorpo específico em uma amostra de soro indica exposição a um antígeno e uma resposta imune. O que isso significa exatamente depende do indivíduo e do teste. Embora não seja geralmente o teste de escolha para o diagnóstico de infecção ativa ou crônica, alguns testes de anticorpos são excelentes indicadores de infecção em muitos indivíduos. Um bom exemplo seria o anticorpo para HIV.

Como acontece com qualquer teste de diagnóstico (novamente, consulte Cecil), o anticorpo para HIV foi avaliado em relação a um padrão, dando-nos uma sensibilidade (quão bom o teste é para encontrar a doença quando ela está presente) e especificidade (quão bom é o teste para excluir doença quando não está presente). Não é perfeito (já vi um falso positivo em minha carreira) e não é útil nas primeiras semanas após a exposição, mas, em geral, é um excelente teste diagnóstico.

Os testes de anticorpos são usados ​​para muitas outras coisas e, novamente, como em qualquer teste de diagnóstico, são avaliados para esse fim. Continuando com o uso desses testes em doenças infecciosas, os testes de anticorpos da hepatite B são um exemplo interessante, já que anticorpos para antígenos diferentes têm significados diferentes. O anticorpo de superfície, por exemplo, indica imunidade tanto da exposição e eliminação quanto da imunização. O anticorpo do núcleo indica a exposição ao próprio vírus, uma vez que o antígeno do núcleo não está presente na vacina. Como acontece com a maioria dos testes de anticorpos, a classe de anticorpos também pode fornecer informações úteis. Os anticorpos IgM geralmente representam a resposta imune inicial, em que os anticorpos IgG representam uma resposta posterior e depuração ou infecção crônica.


Todos os testes sorológicos que usam anticorpos como base para a detecção de uma infecção sistêmica são inerentemente falhos?

Você está pensando teoricamente. Os ensaios sorológicos não são teóricos, eles são empíricos.

Quando qualquer ensaio está sendo caracterizado, ele será correlacionado com um resultado particular. Os ensaios sorológicos não são diferentes. Contanto que haja uma forte correlação com o fenômeno visado, não importa se eles são teoricamente "falhos" (seja lá o que isso signifique); se eles disserem o que você precisa saber, eles são funcionais.

Se cada vez que um teste sorológico mostra 40 ou mais, pode ser demonstrado que um indivíduo está infectado e cada vez que for inferior a 40 o indivíduo não está protegido, então não importa quais problemas teóricos possam haver com o teste. pode ser usado para prever infecção. Aliás, se toda vez que um santo de cerâmica chorou lágrimas de sal, isso se correlacionou com uma infecção, então o teste do santo seria perfeitamente válido na clínica, por mais falha que seja a teoria.

Como você correlaciona seu teste com a presença de infecção, ou algo assim? Normalmente, existem testes padrão-ouro que talvez consumam muito tempo, ou sejam difíceis ou caros de executar rotineiramente, e o ensaio sorológico será referenciado para validação e, então, esperançosamente aprovado por qualquer órgão regulador responsável ( nos EUA, geralmente o FDA).

Não confunda razões teóricas com considerações práticas.


Da Serologia Multiplex à Serolômica-Uma Nova Abordagem para a Resposta do Anticorpo contra o Proteoma SARS-CoV-2

A emergente pandemia de SARS-CoV-2 acarreta uma necessidade urgente de ensaios sorológicos de alto rendimento específicos e sensíveis para avaliar a epidemiologia do SARS-CoV-2. Objetivamos, portanto, desenvolver um ensaio sorológico multiplex SARS-CoV-2 baseado em esferas fluorescentes para a detecção de respostas de anticorpos ao proteoma SARS-CoV-2. As proteínas do proteoma SARS-CoV-2 e a proteína N do SARS-CoV-1 e Coronavírus do resfriado comum (ccCoVs) foram expressas de forma recombinante em E. coli ou células HEK293. O desempenho do ensaio foi avaliado em uma coorte de caso COVID-19 (n = 48 pacientes hospitalizados de Heidelberg), bem como n = 85 controles pré-pandêmicos pareados por idade e sexo do estudo ESTHER. A validação do ensaio incluiu a comparação com imunofluorescência caseira e ensaios comerciais de imunoabsorção enzimática (ELISA). Uma sensibilidade de 100% (95% CI: 86-100%) foi alcançada em pacientes COVID-19 14 dias após o início dos sintomas com dupla soropositividade para SARS-CoV-2 N e o domínio de ligação ao receptor da proteína de pico. A especificidade obtida com este algoritmo foi de 100% (IC 95%: 96-100%). As respostas de anticorpos para ccCoVs N foram abundantemente altas e não se correlacionaram com aquelas para SARS-CoV-2 N. Inclusão de proteínas SARS-CoV-2 adicionais, bem como avaliação separada de imunoglobulinas (Ig) classes M, A e G permitidas para análises exploratórias sobre a progressão da doença e o curso da resposta de anticorpos. Este ensaio de sorologia multiplex para SARS-CoV-2 recentemente desenvolvido alcançou alta sensibilidade e especificidade para determinar a soropositividade para SARS-CoV-2. Sua capacidade de alto rendimento permite a pesquisa epidemiológica do SARS-CoV-2 em grandes estudos populacionais. A inclusão de patógenos adicionais no painel, bem como a avaliação separada de isotipos de Ig, além disso, permitirá abordar questões de pesquisa além da soroprevalência de SARS-CoV-2.

Palavras-chave: Sorologia multiplex SARS-CoV-2.

Declaração de conflito de interesse

Os autores declaram não haver conflito de interesses.

Bonecos

Diagrama esquemático do estudo. Casos de covid19…

Diagrama esquemático do estudo. Os casos COVID-19 foram recrutados na Heidelberg University Clinics entre março ...

Respostas de anticorpos às proteínas SARS-CoV-2 ...

Respostas de anticorpos às proteínas SARS-CoV-2 em n = 85 controles pré-pandêmicos e n…

Respostas de anticorpos às proteínas SARS-CoV-2 ...

Respostas de anticorpos às proteínas SARS-CoV-2 N, S1, S2 e seus respectivos sub-fragmentos (N-EP3, ...


Medindo a resposta do anticorpo ao SARS-CoV-2

Como as vacinas contra SARS-CoV-2 são lançadas em todo o mundo, é cada vez mais importante para os médicos serem capazes de medir a resposta imunológica do corpo ao longo do tempo, para entender o quão eficaz é a proteção e por quanto tempo ela dura. Os testes de anticorpos têm um papel vital a desempenhar na luta contra COVID-19, ajudando a afirmar e medir a resposta dos anticorpos após a infecção ou vacinação.

Para saber mais sobre como os testes de anticorpos estão sendo usados ​​na pandemia, Redes de Tecnologia falou com Heather-Read Harper, Gerente Sênior Europeia de Imunoensaio e Química Clínica da Beckman Coulter. Heather também destacou as vantagens dos testes quantitativos de anticorpos e discutiu por que a detecção de IgG e IgM pode ser valiosa.

Anna MacDonald (AM): Você pode explicar alguns dos papéis que os testes de anticorpos estão desempenhando na luta contra o COVID-19?

Heather Read-Harper (HRH):
Os testes de anticorpos, também conhecidos como testes de sorologia, nos informam as fases do estado imunológico de um indivíduo e procuram a presença de anticorpos. Existem dois tipos de anticorpos tipicamente medidos no sangue: os anticorpos IgM, em geral, são a primeira linha de defesa do corpo contra um vírus, enquanto os anticorpos IgG oferecem uma resposta imunológica mais sustentada a um vírus.

Os testes de anticorpos desempenham um papel fundamental na compreensão do nível de imunidade que um indivíduo desenvolveu contra o vírus SARS-CoV-2. Esse tipo de entendimento pode ajudar a identificar aqueles com maior risco de infecção e aqueles que já foram infectados e podem retornar com segurança ao trabalho ou à universidade, por exemplo.

Testes em uma escala mais ampla também podem fornecer uma visão geral do status de imunidade da população e potencialmente ajudar a orientar o manejo futuro desse vírus.

Com os programas de vacinas em andamento, esses ensaios têm o potencial de desempenhar um papel vital na compreensão da resposta imunológica de um indivíduo à vacina ao longo do tempo e por quanto tempo a imunidade pode ser mantida.

AM: Quais são as vantagens de detectar cada tipo de anticorpo?

HRH:
Nos primeiros dias após a infecção, apenas o vírus pode ser detectado. É quando ele se multiplica e é prontamente transmitido a outras pessoas. Neste ponto, testes de diagnóstico molecular baseados em PCR e testes de antígeno podem ser usados ​​para detectar o vírus. O sistema imunológico do indivíduo então começa a responder à carga viral como parte da fase aguda da infecção. É quando os anticorpos IgM são produzidos e aumentam para combater o vírus e podem ser usados ​​para identificar pacientes com uma infecção mais recente. Após cerca de uma semana, a fase de convalescença da infecção é atingida e IgG é produzida e aumenta, enquanto a IgM começa a diminuir. O tempo que leva, no entanto, varia de um indivíduo para a resposta de outro indivíduo.

Seguindo esses princípios de infecção, podemos utilizar os testes de IgM e IgG para entender o estado de imunidade e o estágio da infecção em um indivíduo, embora se acredite que o IgG forneça a imunidade necessária para reduzir o impacto de uma infecção futura.

AM: Beckman Coulter lançou recentemente o ensaio Access SARS-CoV-2 IgG II. Você pode fornecer uma visão geral de como o teste funciona?

HRH:
O ensaio Access SARS-CoV-2 IgG II mede os anticorpos IgG dirigidos ao domínio de ligação ao receptor da proteína spike do coronavírus em resposta a uma infecção anterior. Ele usa antígenos de vírus imobilizados em partículas magnéticas para capturar anticorpos IgG de amostras de pacientes e os revela usando anticorpos anti-IgG marcados.

O ensaio fornece então um resultado numérico variando de 2,00-450 UA / mL, bem como um resultado qualitativo para anticorpos IgG SARS-CoV-2. O teste tem especificidade confirmada de 99,9% e sensibilidade de 98,9% 15-60 dias após o início dos sintomas. O ensaio Access SARS-CoV-2 IgG II pode ser usado no modo de acesso aleatório (RAM) e perfeitamente integrado em fluxos de trabalho existentes sem processamento em lote. O ensaio também pode ser usado com uma variedade de analisadores Beckman Coulter, incluindo o DxI 800 de alto rendimento projetado para laboratórios grandes, o DxI 600 para laboratórios de médio porte e os analisadores Access 2 para laboratórios menores e clínicas de saúde.

AM: Por que os anticorpos IgG foram direcionados ao domínio de ligação ao receptor da proteína spike escolhidos como o alvo?

HRH:
O coronavírus possui quatro tipos de proteínas: membrana, envelope, nucleocapsídeo e espiga. É a proteína do pico que é a principal proteína de superfície do coronavírus e medeia a entrada nas células hospedeiras. O domínio de ligação ao receptor (RBD) da proteína spike liga-se fortemente a um receptor nas células respiratórias denominado enzima conversora de angiotensina 2, ou ACE2. ACE2 é o receptor de entrada da célula humana e uma vez que a membrana da célula viral se funde com a membrana da célula humana, o genoma do vírus entra nas células humanas e começa a infecção.

Acredita-se que os anticorpos IgG que se ligam ao RBD da proteína spike podem ser a chave para a compreensão da resposta imune ao vírus e em vitro estudos demonstraram que a existência desses anticorpos pode indicar a neutralização da infecção por SARS-CoV-2 e tornar o vírus incapaz de infectar as células.

Os ensaios Beckman Coulter SARS CoV-2 IgM e IgG II são ambos direcionados ao domínio de ligação ao receptor da proteína do pico, a fim de detectar anticorpos que são potencialmente protetores.

AM: Quais são as vantagens de um teste quantitativo de anticorpos?

HRH:
Muitos dos testes de sorologia disponíveis no início desta pandemia eram de natureza qualitativa. Isso significava que apenas um resultado positivo ou negativo foi gerado. Os resultados, portanto, forneceram apenas informações aos médicos sobre se o paciente havia sido exposto ao vírus. O resultado não deu uma imagem clara da resposta imunológica ao longo do tempo.

Os ensaios quantitativos fornecem um valor numérico que pode quantificar o nível de anticorpos no sangue. Ensaios como o SARS CoV-2 IgG II de Beckman Coulter permitem que os médicos monitorem as tendências nos níveis de anticorpos de um paciente estabelecendo uma linha de base quantitativa e, assim, avaliem uma mudança relativa da resposta imune de um indivíduo ao vírus ao longo do tempo.

Heather-Read Harper estava falando com Anna MacDonald, redatora de ciências da Technology Networks.


Métodos

Dados e amostragem

Para compreender a dinâmica da infecção por malária e o impacto da administração em massa anual de medicamentos (MDA), um estudo de coorte prospectivo foi conduzido de 2013 a 2015 em 12 aldeias em cinco regiões administrativas - Costa Oeste (WCR), Margem Norte (NBR), Baixa Regiões de Rio (LRR), Rio Central (CRR) e Rio Superior (URR) - conforme descrito por Mwesigwa et al. [13]. Plasmodium falciparum (PfA prevalência medida pela reação em cadeia da polimerase (PCR) variou de 2,27 a 19,60% nas regiões do Rio Central e do Alto Rio, respectivamente (Fig. 1). Residentes acima de 6 meses de idade foram incluídos no estudo, e pesquisas mensais foram realizadas durante a estação de transmissão da malária de junho a dezembro de cada ano, durante a estação seca em abril de 2014, e antes da implementação do MDA em maio e junho de 2014 e 2015 (Figura 2). Amostras individuais de sangue em picadas de dedo foram coletadas para estimativa de hemoglobina e em papel de filtro (Whatman 3 Corporation, Florham Park, NJ, EUA) para análise molecular e sorológica. Os casos clínicos de malária incluíram indivíduos com sintomas em unidades de saúde (por exemplo, detecção passiva de casos) ou indivíduos identificados em aldeias por enfermeiras do estudo com histórico de febre nas 24 horas anteriores ou temperatura axilar ≥ 37,5 ° C e um teste de diagnóstico rápido positivo (RDT) resultado (Paracheck Pf, Orchid Biomedical System, Índia).

Mapa do estudo da dinâmica de transmissão da malária com regiões e vilas de estudo por prevalência de PCR

Cronogramas do estudo. Cronograma do estudo da dinâmica de transmissão da malária mostrado em preto e verde. Linha do tempo do estudo sorológico mostrada em azul para as regiões da Costa Oeste e do Alto Rio (configurações de transmissão baixa e moderada, respectivamente). A análise sorológica foi realizada em amostras de pesquisas mensais de toda a aldeia em N’demban e Besse na região da costa oeste (uma), Njaiyal e Madina Samako na região do Alto Rio (b) e amostras longitudinais de indivíduos com resultado de teste de diagnóstico rápido (RDT) ou reação em cadeia da polimerase (PCR) positivo durante o Malaria Transmission Dynamics Study. As amostras para análise sorológica foram processadas no Luminex MAGPIX. As amostras de pesquisas mensais foram analisadas usando microscopia, testes de diagnóstico rápido (RDTs) e reação em cadeia da polimerase (PCR)

O estudo sorológico apresentado aqui é um subconjunto do Malaria Transmission Dynamics Study e incluiu todas as amostras disponíveis (n = 4599) a partir de uma seleção de pesquisas mensais em quatro aldeias, totalizando 1795 indivíduos (Fig. 2). Na região da costa oeste (Besse e N’Demban), as amostras processadas para análise sorológica foram de pesquisas realizadas no início da temporada de transmissão em julho de 2013 (N = 534) e no final da temporada em dezembro de 2013 (N = 524). Na Região do Alto Rio (URR), a análise sorológica incluiu todas as amostras coletadas em Njaiyal e Madina Samako em julho de 2013 (N = 778), dezembro de 2013 (N = 628), abril (estação seca) 2014 (N = 799), e dezembro de 2014 (N = 737) (Tabela 1). Essas regiões representam extremos de duas intensidades de transmissão, com meses selecionados no início e no final da temporada de transmissão. As amostras de casos clínicos de PCD foram vinculadas pelo código de identificação do participante do estudo a amostras dos mesmos indivíduos coletadas durante pesquisas mensais de rotina. Para estimar ainda mais a associação entre as respostas de anticorpos em nível individual e clínicas ou Pf infecção, as amostras de pesquisa mensal de toda a vila na região da costa oeste e na região do rio superior, conforme descrito acima, foram combinadas com um subconjunto adicional de 1244 amostras longitudinais de 316 indivíduos que tiveram um resultado de teste RDT ou PCR positivo ou apresentaram sintomas clínicos em qualquer ponto durante o estudo de dinâmica de transmissão da malária (Fig. 2). Para esses indivíduos, todas as amostras disponíveis do estudo foram processadas para capturar longitudinalmente suas respostas sorológicas antes e depois de um resultado de teste de RDT ou PCR positivo.

Este estudo foi aprovado pelo Comitê Conjunto de Ética do Governo da Gâmbia / MRC (SCC1318). O consentimento verbal foi obtido primeiro nas reuniões de sensibilização da aldeia, seguido do consentimento informado por escrito individual para todos os participantes. Os pais / responsáveis ​​forneceram consentimento por escrito para crianças menores de 17 anos, e o consentimento foi obtido de crianças entre 12 e 17 anos.

Seleção e design de antígenos

Os antígenos foram selecionados a partir de uma triagem inicial de 856 candidatos em um microarray de proteínas de transcrição e tradução in vitro (IVTT) com base na correlação com infecção por malária em crianças [11]. Os antígenos foram gerados e expressos em Escherichia coli (E. coli) como proteínas de fusão marcadas com glutationa S-transferase (GST) [20,21,22], com exceção de PfAMA1 expressa em Pichia pastoris como uma proteína marcada com histidina [15]. A purificação da proteína foi conduzida por cromatografia de afinidade (Glutationa Sepharose 4B, GE Healthcare Life Sciences) ou HisPur Ni-NTA (Invitrogen) para proteínas marcadas com GST e His, respectivamente, e concentração, qualidade e pureza do rendimento do antígeno avaliado usando um Bradford ensaio e SDS-PAGE. Lisado bacteriano da cultura de não transformados E. coli foi usado em tampões de ensaio para eliminar a reatividade de fundo para E. coli proteínas que não eram específicas das proteínas-alvo da malária.

Além disso, para contabilizar a reatividade potencial de não malária contra proteínas de fusão marcadas com GST, grânulos acoplados a GST foram incluídos para quantificar respostas de imunoglobulina específica de GST (IgG) e corrigir para ligação não específica. Após o processamento laboratorial, havia 71 amostras de participantes com respostas de anticorpos GST acima de 1000 intensidade mediana de fluorescência (MFI), que foi definido como o limite para indicar possível ligação não específica à malária, e foram excluídas de análises posteriores. O toxóide tetânico (TT, Massachusetts Biologic Laboratories) também foi incluído como um controle positivo interno, assumindo que os gambianos vacinados apresentariam respostas de anticorpos a esta proteína alvo. Um resumo dos construtos de antígeno e condições de acoplamento são detalhados na Tabela 2.

Procedimentos de laboratório

As respostas de anticorpos específicos do antígeno foram quantificadas usando o protocolo Luminex MAGPIX descrito em Wu et al. 2019 [23]. O plasma foi eluído de manchas de sangue seco de 6 mm (DBS) (4 μl equivalente de sangue total) e agitado durante a noite à temperatura ambiente em 200 μl de tampão de eluição de proteína contendo solução salina tamponada com fosfato (PBS) (pH 7,2), azida de sódio 0,05% e 0,05% Tween-20, produzindo uma diluição de amostra inicial de 1:50. Um dia antes do processamento do ensaio, as amostras foram diluídas para uma diluição final de 1: 500 usando 10 μl da amostra de pré-diluição 1:50 e 90 μl de tampão B de bloqueio para evitar ligação não específica (1xPBS, Tween 0,05%, 0,5 % de albumina de soro bovino (BSA), 0,02% de azida de sódio, 0,1% de caseína, 0,5% de álcool polivinílico (PVA), 0,5% de polivinilpirrolidona (PVP) e 1500 μg / ml E. coli extrair). Os controles negativos e positivos também foram incubados 1 dia antes em Tampão B, com controles negativos preparados em uma diluição de 1: 500 e controles positivos reunidos em Gambian em uma diluição em série de 5 vezes de 6 pontos (1: 10-1: 31.250). O controle positivo foi baseado em um pool de 22 amostras de soro de indivíduos hiperimunes à malária na Gâmbia, e dez amostras de plasma individuais de adultos europeus virgens de malária foram usadas como controles negativos.

As amostras foram preparadas para PCR de diagnóstico conforme descrito por Mwesigwa et al. [13]. Resumidamente, o DNA foi extraído de três DBS de 6 mm usando o robô automatizado QIAxtractor (Qiagen). Controles negativos e positivos (3D7) foram incluídos para controle de contaminação cruzada e eficiência de extração de DNA, respectivamente. Os DBS foram lisados ​​por incubação em tampão de digestão de tecido a 60 ° C por 1 h e os eluatos digeridos foram aplicados em placas de captura, lavados e o DNA eluído em 80 μl. O DNA extraído (4 μl) foi usado em uma nested PCR, amplificando a multi-cópia Plasmodium sequências de genes de RNA ribossomal usando primers específicos de gênero e espécie [24]. Todos os produtos de PCR foram executados usando o sistema de eletroforese capilar QIAxcel (Qiagen), usando o cartucho de triagem e marcador de alinhamento de 15-1000 bp. Os resultados foram exportados e pontuados duas vezes usando a função de pontuação binária QIAxcel e manualmente por visualização das imagens de gel e as discrepâncias foram pontuadas por um terceiro leitor independente. Todos os leitores não tinham conhecimento dos dados da pesquisa dos participantes.

Análise estatística

A análise dos dados foi baseada nos níveis totais de IgG para cinco antígenos como marcadores potenciais de sero-incidência [11] - proteína 5 de membrana transcrita anteriormente (Etramp5.Ag1), proteína de exportação de gametócito 18 (GEXP18), proteína de choque térmico 40 (HSP40.Ag1) , antígeno de ligação a eritrócitos 175 RIII-V (EBA175) e homólogo 2 de proteína de ligação a reticulócitos (Rh2.2030). Três antígenos associados à resposta de anticorpos de longa duração -P. falciparum Antígeno de superfície de merozoita 1 região de terminal carboxi de 19 kDa (PfMSP119), P. falciparum antígeno de membrana apical 1 (PfAMA1), e P. falciparum proteína rica em glutamato, região 2 (PfGLURP.R2) - foram incluídos como uma comparação, que têm sido historicamente usados ​​para avaliar as taxas de seroconversão ao longo do tempo [8, 9] e também foram estudados anteriormente na Gâmbia [6, 7]. Para antígenos associados a anticorpos de longa duração (PfMSP119, PfAMA1, PfGLURP.R2), indivíduos que residem em uma região endêmica previamente exposta à malária, mas não infectada recentemente, ainda podem ter níveis residuais de anticorpos que são significativamente mais elevados do que indivíduos virgens de malária em regiões não endêmicas. Portanto, um modelo de mistura gaussiana de dois componentes foi usado para definir as distribuições de níveis negativos e positivos de anticorpos, expressos em unidades de intensidade mediana de fluorescência (MFI). Os limiares de seropositividade foram definidos como os valores de log MFI médios mais dois desvios padrão da distribuição negativa [25]. Modelos de mistura foram estimados usando o 'normalmixEM'Função no'mixtools'Pacote v1.0.4 na versão R 3.6.1. Para antígenos associados a anticorpos de vida mais curta, onde a evidência estatística de uma distribuição bimodal de respostas de anticorpos na população não era forte, devido ao declínio mais rápido dos níveis de anticorpos pós-infecção - Etramp5.Ag1, GEXP18, HSP40.Ag1, EBA175 e Rh2 0,2030 — o limiar de soropositividade foi definido pelo log MFI médio mais três desvios padrão de 71 doadores de sangue europeus virgens de malária usados ​​como controles negativos.

Associação a nível individual entre a resposta de anticorpos e as probabilidades concomitantes de malária clínica (detectada passivamente através da unidade de saúde ou enfermeiras do estudo na comunidade) ou assintomática P. falciparum infecção (ativamente detectada usando PCR de amostras de pesquisa mensal) foram avaliadas usando equações de estimativa generalizadas (GEE). A análise foi ajustada para a faixa etária (1–5 anos, 6–15 anos e maior que 15 anos) e o uso de redes tratadas com inseticida de longa duração (LLINs) nas últimas 24 horas e permitiu o agrupamento no nível do composto, onde composto é um conjunto de famílias localizadas centralmente em torno de uma residência principal. A magnitude da associação entre a resposta de anticorpos e as chances de infecção foi avaliada para interação com a faixa etária. Com base em um subconjunto de amostras longitudinais, a associação de nível individual entre a resposta de anticorpos e a infecção recente nos 4 meses anteriores (em oposição à infecção atual no mesmo ponto de tempo) também foi avaliada usando um modelo GEE, ajustado para faixa etária, uso de LLIN , e efeitos aleatórios no nível do composto, como acima.

Usando um modelo GEE, as probabilidades de nível individual de malária clínica ou infecção assintomática foram avaliadas quanto à associação com residir no mesmo composto que um indivíduo seropositivo. Da mesma forma, a associação entre as chances individuais de infecção e sero-prevalência de nível de composto (& lt 50% ou & gt 50%) foi avaliada usando um modelo linear generalizado de efeitos mistos ajustado para grupo de idade e uso de LLIN e efeitos aleatórios no nível de composto, o que também explica o efeito potencial das diferenças geográficas na intensidade da transmissão. Para garantir que as estimativas não sejam influenciadas pela soroprevalência de compostos pequenos, a análise foi ponderada pelo número de indivíduos no composto (cujo soropositivo foi avaliado) e incluiu apenas compostos com pelo menos quatro indivíduos. Os modelos foram ajustados usando os pacotes ‘geeM’ e ‘lme4’ na versão R 3.14.

Soroprevalência em nível de aldeia entre crianças de 2 a 10 anos na Região da Costa Oeste e na Região do Alto Rio em julho e dezembro de 2013 (n = 1001) foi comparado com todas as idades clínicas e P. falciparum taxas de incidência de infecção nos mesmos meses, as últimas relatadas anteriormente por Mwesigwa et al. [13]. Clínica mensal e P. falciparum as taxas de incidência de infecção foram definidas respectivamente como o número de novos casos clínicos ou P. falciparum infecções (indivíduos PCR-positivos que foram PCR-negativos na pesquisa mensal anterior) divididos pelo total de pessoas anos em risco (PYAR). Essa faixa etária foi selecionada para se alinhar a outras métricas de vigilância de rotina, como o índice parasita anual (API), normalmente usando essa faixa etária como uma população sentinela. A força da relação entre as taxas de incidência no nível da aldeia e a soroprevalência para cada antígeno foi avaliada usando o coeficiente de correlação de Pearson. Os dados de abril e dezembro de 2014 não foram incluídos na análise devido à incidência clínica e Pf as taxas de infecção dessas pesquisas ainda não foram relatadas.


Ensaios de sorologia multiplex SARS-CoV-2

Ensaios de serologia ProcartaPlex

As proteínas que servem como antígenos primários para estimular uma resposta imune produzindo anticorpos IgA, IgM e IgG durante a infecção por SARS-CoV-2 incluem o nucleocapsídeo (N), a proteína do pico (S) e sub-regiões da proteína do pico, como como o domínio de ligação ao receptor (RBD) e as regiões S1. A proteína Nucleocapsídeo (N) tem a maior homologia (90%) entre o SARS-CoV-1 e o SARS-CoV-2 (1). Os kits de teste de sorologia disponíveis durante a fase inicial da pandemia de SARS-CoV-2 foram desenvolvidos para detectar anticorpos contra o Nucleocapsídeo, que exibiu reatividade cruzada significativa e, portanto, leituras de falso positivo mais altas para indivíduos expostos ao SARS-CoV-1 (1) . A proteína do pico (S) SARS-CoV se reúne em uma estrutura trimerizada para formar uma aparência semelhante a uma coroa (portanto, corona) e é composta por uma subunidade S1 e S2. Dentro de S1, o domínio de ligação ao receptor (RBD), que está localizado no subdomínio C-terminal, tem maior identidade (74%) entre SARS-CoV e SARS-CoV-2 do que o domínio N-terminal, consistente com a visão de que O SARS-CoV-2 pode usar ACE2 como seu receptor para a entrada em células hospedeiras como o SARS-CoV (2). O RBD foi identificado como um dos locais imunodominantes da proteína spike SARS-CoV-2, com anticorpos contra a proteína spike se correlacionando bem com a neutralização. Além disso, é importante testar a reatividade sorológica cruzada com coronavírus endêmicos e sazonais para descartar resultados falso-positivos. O Painel ProcartaPlex 11-Plex do Coronavírus Humano Ig Total permite a triagem de quatro anticorpos SARS-CoV-2 (Trímero de Spike, subunidade S1, RBD e Nucleocapsídeo), seis cepas de coronavírus (SARS-CoV-1, MERS, CoV-NL63, CoV -KHU1, CoV-229E, CoV-OC43) e um controle negativo em um único poço usando a tecnologia Luminex xMAP. A detecção simultânea de anticorpos anti-SARS-CoV-2 e anticorpos coronavírus relacionados em um ensaio pode economizar tempo para fornecer um conjunto de dados holístico completo usando amostras de plasma ou soro.

Figura 1. Resultados da triagem de 39 controles Covid PCR (+) e 168 PCR saudáveis ​​(-) para antígenos SARS-CoV-2. Os resultados mostram que os níveis de anticorpos detectados para o temporizador de pico, antígenos S1, RBD e Nucleocapsídeo correspondem aos resultados esperados de altos níveis de anticorpos para PCR (+) e baixos níveis de anticorpos para amostras de PCR (-).


Documentos e recursos do ensaio SARS-CoV-2

Documentos

Manual de instruções dos ensaios de sorologia Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 (PDF 601 KB)

Saiba mais sobre o ensaio com instruções detalhadas, fluxos de trabalho, conteúdo do kit, armazenamento e dicas de solução de problemas com este manual de instruções.

Guia rápido dos ensaios de sorologia Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 (PDF 68 KB)

Descubra como preparar e executar uma placa de ensaio de sorologia Bio-Plex SARS-CoV-2 completa de 96 poços com este guia rápido.

Folha de informações do produto do painel Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 N / RBD / S1 / S2 4-Plex (PDF 439 KB)

Obtenha detalhes do produto, como características do ensaio e resultados de reatividade cruzada com este folheto de informações do produto.

Protocolo de ensaio semi-quantitativo Bio-Plex Pro IgG humano SARS-CoV-2 (PDF 96 KB)

Produza resultados com este protocolo semiquantitativo para uso com os ensaios de sorologia Bio-Plex Human IgG SARS-CoV-2 N / RBD / S1 / S2.

Folheto de sistemas Bio-Plex Multiplex (PDF 15.9 MB)

Aprenda como você pode reduzir o tempo para resultados e amostras enquanto descobre mais com os imunoensaios multiplex Bio-Plex, instrumentos e software.

Ensaios de sorologia quantitativos Bio-Plex Pro IgG humana SARS-CoV-2 usando uma nota de aplicação de curva padrão (PDF 420 KB)

Saiba como o controle sorológico VIROTROL SARS-CoV-2 é validado para uso como material de referência para quantificar os níveis de anticorpos IgG específicos para SARS-CoV-2 e ndash usando os ensaios de sorologia SARS-CoV-2 de IgG humana Bio-Plex Pro nesta nota de aplicação.

Bio-Plex Analyte Guide (PDF 2.2 MB)

Explore os diferentes imunoensaios e painéis multiplex disponíveis na plataforma Bio-Plex. Avalie as características de desempenho do ensaio e os dados da amostra para escolher o painel que se adequa à sua aplicação.

Webinars

Role of Aberrant Cytokine Activity in Host Immune Response to COVID-19

In this webinar, we discuss early research and nascent hypotheses regarding the pathophysiology of SARS-CoV-2 induced COVID-19 disease by evaluating cytokine and chemokine profiles, the role of chronic inflammation in comorbidities, and the arc of immune resolution of historical virulent pathogens, such as SARS and MERS.

Multiplex Immunoassays in Vaccine Research and Development

Get the most data out of your sample, without spending time on individual ELISAs. Learn how multiplex assays are being used on the front lines to understand patient immune response during infection, and discuss the most commonly asked questions around targets, panels, and multi-plate data analysis.

Vaccine Development and Manufacturing

Tips for overcoming developmental hurdles, technologies that can shorten timelines, and novel tools for manufacturing and quality control.

Immunological Response Factors to SARS‑CoV‑2 in Acquired Immunity

In this webinar, we will be discussing the immune response to SARS‑CoV2, both in the context of natural exposure to the virus as well as induced immunity from vaccination. We will also investigate the relationship between symptom severity and the longevity of acquired immunity.


SARS-CoV-2 Assays To Detect Functional Antibody Responses That Block ACE2 Recognition in Vaccinated Animals and Infected Patients

FIG 1 ACE2 receptor expression and affinity. (A) Overview of soluble ACE2 receptor design (ACE2-IgHu). (B) Affinity of SARS CoV-2 receptor binding domain for immobilized ACE2-IgHu assessed by SPR (27 nM) curves are concentrations of RBD X, Y, and Z. (C) Affinity of ACE2-IgHu for immobilized SARS CoV-2 full-length spike protein assessed by ELISA. Optimal concentration of ACE2-IgHu for competition assays (∼EC90, red arrow) requires high signal without excess receptor present. FIG 2 ACE2 receptor competition assay development. (A) Competition ELISA schematic displaying immobilized anti-His pAb (red) capturing His6×-tagged SARS-CoV-2 spike protein (rainbow). Premixed ACE2-IgHu (green, blue) at a constant concentration with a dilution series of competitors (green, red) is added, and anti-human HRP (green) determines the amount of ACE2-IgHu remaining in the presence of competitors through a colorimetric readout. (B) Four constant concentrations of ACE2-IgHu were tested with various concentrations of the ACE2-IgMu competitor to establish an optimal ACE2-IgHu concentration which displays a full blocking curve (red, 0.10 μg/ml) from the competitor dilution series while retaining a wide range in signal. (C) Pseudovirus neutralization curves for a control antibody (non-SARS-CoV-2) in red and for ACE2-IgHu in blue.

Animal IgG and serological competition.

FIG 3 Animal IgG and serological competition. (A) IgG and serological competition schematic. Anti-His pAb captures SARS-CoV-2 spike protein. Immunized sera or IgG from small animals are used as competitors to block ACE2-IgHu receptor binding when premixed. ACE2-IgHu remaining is determined from an anti-human-HRP colorimetric readout. (B) IgGs present in a vaccinated BALB/c mouse block ACE2-IgHu binding with greater effect when the full-length SARS-CoV-2 S1-S2 spike protein is immobilized versus the S1 subunit by itself. (C) Area under the concentration-time curve (AUC) schematic displaying the larger area for uninhibited ACE2 binding versus the area from curves showing competition with ACE2. (D) AUC of IgGs purified from immunized rabbit sera (IgGr low dose, blue IgGr high dose, red) versus naive IgGr or day 0 IgGr. (E) AUC of sera from immunized rabbits (low dose rabbit sera, blue high dose rabbit sera, red) versus naive rabbit sera or day 0 rabbit sera. (F) AUC of sera from immunized guinea pigs at week 2 (dark blue) and individual animals (blue), naive sera (gray), and pooled day 0 sera from all animals (black). The pooled immunized curve displayed a comparable AUC to the average AUC from all individual immunized animals.

Primate serological competition.

FIG 4 Primate serological competition. (A) Competition ELISA schematic displaying immobilized His6×-tagged SARS-CoV-2 spike protein (rainbow). Preblocking of the spike protein with primate sera (blue) at various concentrations was added followed by ACE2-IgMu (green, blue) at a constant concentration. Anti-mouse HRP (green) determines the amount of ACE2-IgMu remaining in the presence of competitors through a colorimetric readout. (B) Affinity of ACE2-IgMu for immobilized SARS-CoV-2 S1+S2 full-length spike protein assessed by ELISA. Optimal concentration of ACE2-IgMu for competition assays (red arrow, 0.4 μg/ml) requires high signal without excess receptor present. (C) Optimal ACE2-IgMu concentration which displays a full blocking curve (0.40 μg/ml) from the competitor dilution series (ACE2-IgHu) while retaining a wide range in signal. (D) NHP sera pooled from five vaccinated animals were used as competitors in the primate competition assay. The AUC from vaccinated NHP sera (blue) versus day 0 NHP sera (black). (E) Human sera from nine SARS-CoV-2-positive COVID-19 patients were tested in the primate competition assay and compared with 16 naive human sera collected prepandemic. The AUC of the COVID-19 patient serum (purple) is significantly decreased compared to the prepandemic human serum (gray). The median is shown as a solid black line, and quartiles are shown as dashed black lines. (F) Human sera were analyzed by a pseudovirus neutralization assay. The samples and the coloring are the same as in (E). Statistics include a two-tailed t test with P values indicated. FIG 5 ACE2 receptor blocking correlates with pseudovirus neuralization. A symbol represents each of the individual datapoints where we had a paired AUC blocking and pseudovirus ID50 valores. The human samples are in triangles, the mice in circles, individual Guinea pigs in squares, Guinea pig pools in diamonds, and rabbit pools in hexagons. SARS-CoV-2 spike-experienced samples are shown in color. Naïve samples and healthy donors are shown in gray. Least-squares fit line is shown with P value and R squared from Prism.

SPR-based assay for ACE2 receptor blocking.

FIG 6 ACE2 receptor competition assay development. (A) Overview of SPR experiment depicting SARS-CoV-2 RBD capture by streptavidin-biotin interaction, sera injected as analyte, and ACE2 injected as second analyte. (B) Sensorgram for ACE2 blocking SPR assay with ACE2-IgHu injected as sample (ACE2amostra) as indicated and ACE-IgHu injected as receptor (ACE2receptor) as indicated. Sample responses were referenced to blank injections. Each curve corresponds to a 3-fold dilution of ACE2amostra starting at 1,500 nM as indicated on the right, and the ACE2receptor was injected at a constant concentration of 100 nM to all curves. (C) Response in RUs measured at the end of sample (ACE2amostra) injection (blue) and receptor (ACE2receptor) injection (red) at each concentration of sample. (D) ACE2 inhibition curve derived from RUs at each concentration.

Agradecimentos

We thank all the participants involved in the study Bernie McCudden and Jenny Mitchell for support with the cohort and Jill Garlick, Janine Roney, Anne Paterson and the research nurses at the Alfred Hospital. This work was supported by the Australian National Health and Medical Research Council (NHMRC) Leadership Investigator Grant to KK (#1173871), NHMRC Program Grant to DLD (#1132975), Research Grants Council of the Hong Kong Special Administrative Region, China (#T11-712/19-Ncdf) to KK, the Jack Ma Foundation to KK, KS and AWC, the Medical Research Future Fund (#2005544) to KK, SJK, AKW and AWC, the a2 Milk Foundation to KS, MRFF Award (#1202445) to KK, NHMRC Program Grant (#1071916) to KK. KK was supported by NHMRC Senior Research Fellowship (1102792), DLD by a NHMRC Principal Research Fellowship (#1137285) and KS by an NHMRC Investigator grant (#1177174). THON is supported by NHMRC EL1 Fellowship (#1194036). LH is supported by the Melbourne International Research Scholarship (MIRS) and the Melbourne International Fee Remission Scholarship from The University of Melbourne. JRH and WZ are supported by the Melbourne Research Scholarship from The University of Melbourne. XJ is supported by China Scholarship Council-University of Melbourne joint Scholarship. CES has received funding from the European Union's Horizon 2020 research and innovation programme under the Marie Skłodowska-Curie grant agreement (#792532). CES and KS received funding from the Doherty Collaborative Seed Grant. KK and AWC were supported by the University of Melbourne Dame Kate Campbell Fellowship. The Melbourne WHO Collaborating Centre for Reference and Research on Influenza is supported by the Australian Government Department of Health.


SARS-CoV-2 Serology Testing in the Setting of Vaccination

To enable an effective vaccination strategy, we advocate for the use of accessible, automated, high-throughput SARS-CoV-2 serology testing to help confirm efficacy and promote public health. Siemens Healthineers formulated a position paper based on input from experts in the infectious disease, immunology and vaccine development fields and the currently available body of literature.

“In clinical practice, my patients who have either had the Covid-19 infection or have been vaccinated have been extremely interested in measuring their antibody response. I explain to them that this is the best surrogate we currently have to predict if they will likely be protected from future infection. Having had the vaccine myself and subsequently testing my own blood, I was immensely relieved to see I had developed anti-spike protein antibodies. It felt like I had put on an anti-Covid-19 Kevlar suit.”

Latinis Rheumatology, LLC, Kansas City (Harrisonville, MO and Leawood, KS)

"The position statement that you have here is timely. We need to have this discussion and preparation ahead of vaccinating the general population. Serology status is incredibly important due to asymptomatic carriers, and as these vaccines are introduced the need for robust neutralizing antibody testing would become even more important to understand where we are both before and after vaccination."

University of Cambridge (UK), Department of Medicine/CITIID

“As an immunologist and clinician, I certainly see the value of serology testing in understanding the immune response to vaccines, as outlined in the position paper. With every Covid-19 vaccine targeting the spike protein, it just makes sense that measuring the immune response against spike protein is the focus going forward with serology testing. Further, scientifically I think we’re going to see a quantitative threshold for Covid-19 antibody levels that becomes apparent in which the Covid-19 immune response weakens enough that the risk of infection returns. In this respect, measuring Covid-19 antibodies after a natural infection or after vaccination will determine if someone has reached that protective threshold and remeasuring antibody levels over time will determine the need to reimmunize. In some cases, if people who have had Covid-19 infection or those who have been immunized didn’t produce sufficient antibodies, they may need to be revaccinated sooner rather than later.”

Latinis Rheumatology, LLC, Kansas City (Harrisonville, MO and Leawood, KS)

“In clinical practice, my patients who have either had the Covid-19 infection or have been vaccinated have been extremely interested in measuring their antibody response. I explain to them that this is the best surrogate we currently have to predict if they will likely be protected from future infection. Having had the vaccine myself and subsequently testing my own blood, I was immensely relieved to see I had developed anti-spike protein antibodies. It felt like I had put on an anti-Covid-19 Kevlar suit.”

Latinis Rheumatology, LLC, Kansas City (Harrisonville, MO and Leawood, KS)

"The position statement that you have here is timely. We need to have this discussion and preparation ahead of vaccinating the general population. Serology status is incredibly important due to asymptomatic carriers, and as these vaccines are introduced the need for robust neutralizing antibody testing would become even more important to understand where we are both before and after vaccination."

University of Cambridge (UK), Department of Medicine/CITIID

“As an immunologist and clinician, I certainly see the value of serology testing in understanding the immune response to vaccines, as outlined in the position paper. With every Covid-19 vaccine targeting the spike protein, it just makes sense that measuring the immune response against spike protein is the focus going forward with serology testing. Further, scientifically I think we’re going to see a quantitative threshold for Covid-19 antibody levels that becomes apparent in which the Covid-19 immune response weakens enough that the risk of infection returns. In this respect, measuring Covid-19 antibodies after a natural infection or after vaccination will determine if someone has reached that protective threshold and remeasuring antibody levels over time will determine the need to reimmunize. In some cases, if people who have had Covid-19 infection or those who have been immunized didn’t produce sufficient antibodies, they may need to be revaccinated sooner rather than later.”

Latinis Rheumatology, LLC, Kansas City (Harrisonville, MO and Leawood, KS)

“In clinical practice, my patients who have either had the Covid-19 infection or have been vaccinated have been extremely interested in measuring their antibody response. I explain to them that this is the best surrogate we currently have to predict if they will likely be protected from future infection. Having had the vaccine myself and subsequently testing my own blood, I was immensely relieved to see I had developed anti-spike protein antibodies. It felt like I had put on an anti-Covid-19 Kevlar suit.”

Latinis Rheumatology, LLC, Kansas City (Harrisonville, MO and Leawood, KS)

Serology tests can inform vaccination utilization and status of vaccine response at multiple junctures:

  • Data to establish a threshold for protection or immunity
  • Post-vaccination initial response 1
  • Duration of vaccination response 2

Appropriate characteristics of a serology assay in the assessment of need to vaccinate and vaccine response:

  • Quantitative results
  • Spike protein receptor-binding domain (S1 RBD) neutralizing IgG antibody detection
  • Very high specificity (≥99.5%)

Neutralization of the SARS-CoV-2 virus with S1-RBD

Neutralizing Antibodies: Why the Spike Protein?

SARS-CoV-2 serology assays that utilize the receptor-binding domain (RBD) of the S1 spike antigen detect neutralizing antibodies that block the virus entry into cells. 3-8 S1-RBD-specific assays are likely to prove advantageous over S1 and whole spike, especially if using a quantitative assay, as neutralizing versus binding antibodies might be expected to be enriched and therefore better correlate to immunity.

The utilization of the S1-RBD is aligned with the multiple vaccines in development that target or include the SARS-CoV-2 S1 RBD, with the goal of producing neutralizing (and therefore likely protective) antibodies in vaccinated subjects. 9 The spike protein and particularly the RBD are the most common target of vaccine designs.


SARS-CoV-2 Multiplex Serology Assays

ProcartaPlex Serology Assays

The proteins that serve as primary antigens to stimulate an immune response producing IgA, IgM, and IgG antibodies during SARS-CoV-2 infection include the nucleocapsid (N), the spike (S) protein, and sub-regions of the spike protein such as the receptor binding domain (RBD) and the S1 regions. The Nucleocapsid (N) protein has the highest homology (90%) between SARS-CoV-1 and SARS-CoV-2 (1). Serology test kits available during the early phase of the SARS-CoV-2 pandemic were developed to detect antibodies against the Nucleocapsid, which displayed significant cross-reactivity, and thus higher false positive readings for subjects exposed to SARS-CoV-1 (1). The SARS-CoV spike (S) protein assembles into a trimerized structure to form a crown-like (hence corona) appearance and is composed of a S1 and S2 subunit. Within S1, the receptor binding domain (RBD), which is located in the C-terminal subdomain, has higher identity (74%) between SARS-CoV and SARS-CoV-2 than the N-terminal domain, consistent with the view that SARS-CoV-2 may use ACE2 as its receptor for entry into host cells like SARS-CoV (2). The RBD has been identified as one of the immunodominant sites of the SARS-CoV-2 spike protein, with antibodies against the spike protein correlating well with neutralization. In addition, it is important to test serologic cross-reactivity with endemic and seasonal coronaviruses to rule out false-positive results. The Human Coronavirus Ig Total 11-Plex ProcartaPlex Panel enables screening of four SARS-CoV-2 antibodies (Spike trimer, S1 subunit, RBD, and Nucleocapsid), six coronavirus strains (SARS-CoV-1, MERS, CoV-NL63, CoV-KHU1, CoV-229E, CoV-OC43 ), and one negative control in a single well using Luminex xMAP technology. Simultaneous detection of anti-SARS-CoV-2 antibodies and related coronavirus antibodies in one assay can save time to provide a complete, holistic data set using plasma or serum samples.

Figure 1. Screening results from 39 Covid PCR (+) and 168 healthy PCR (-) controls for SARS-CoV-2 antigens. Results show antibody levels detected for spike timer, S1, RBD, and Nucleocapsid antigens correspond to the expected results of high antibody levels for PCR (+) and low antibody levels for PCR (-) samples.


Referências

Naji H (2020) O surgimento do novo coronavírus 2019-nCoV de 2019. Eur J Med Health Sci. https://doi.org/10.24018/ejmed.2020.2.1.169

Chan JFW, Li KSM, To KKW et al (2012) A descoberta do novo betacoronavírus humano 2c EMC / 2012 (HCoV-EMC) é o início de outra pandemia semelhante à SARS? J Infect 65: 477–489. https://doi.org/10.1016/j.jinf.2012.10.002

Lim YX, Ng YL, Tam JP, Liu DX (2016) Coronavírus humanos: uma revisão das interações vírus-hospedeiro. Diseases. https://doi.org/10.3390/diseases4030026

Jones BA, Grace D, Kock R et al (2013) Emergência de zoonoses ligada à intensificação agrícola e mudança ambiental. Proc Natl Acad Sci 110: 8399–8404. https://doi.org/10.1073/pnas.1208059110

Kahn JS, McIntosh K (2005) História e avanços recentes na descoberta do coronavírus. Pediatr Infect Dis J 24: S223 – S227. https://doi.org/10.1097/01.inf.0000188166.17324.60

Fehr AR, Perlman S (2015). Coronavírus: uma visão geral de sua replicação e patogênese. Em Coronavírus. Métodos em biologia molecular. Humana Press, Nova York, pp 1-23

Sun C, Chen L, Yang J et al (2020) SARS-CoV-2 e SARS-CoV spike-RBD estrutura e comparação de ligação ao receptor e potenciais implicações no desenvolvimento de anticorpos neutralizantes e vacinas. bioRxrv. https://doi.org/10.1101/2020.02.16.951723

Schmaljohn AL (2013) Anticorpos antivirais protetores sem atividade neutralizante: precedentes e evolução de conceitos. Curr HIV Res 11: 345–353. https://doi.org/10.2174/1570162x113116660057

Bosch BJ, De HCAM, Rottier PJM (2004) Coronavirus spike glycoprotein, estendida no terminal carboxi com proteína fluorescente verde, é competente para montagem. J Virol 78: 7369–7378. https://doi.org/10.1128/JVI.78.14.7369

Fan H, Ooi A, Tan YW et al (2005) A proteína do nucleocapsídeo do vírus da bronquite infecciosa do coronavírus: estrutura cristalina de seu domínio N-terminal e propriedades de multimerização. Structure 13: 1859–1868. https://doi.org/10.1016/j.str.2005.08.021

Jiang S, Hillyer C, Du L (2020) Anticorpos Neutralizantes contra SARS-CoV-2 e outros coronavírus humanos. Trends Immunol 41: 355–359. https://doi.org/10.1016/j.it.2020.03.007

di Gabriella M, Cristina S, Concetta R et al (2020) infecção por SARS-Cov-2: resposta do sistema imunológico humano e possíveis implicações para o teste rápido e tratamento. Int Immunopharmacol 84: 106519. https://doi.org/10.1016/j.intimp.2020.106519

Lin Q, Zhu L, Ni Z et al (2020) Duração dos anticorpos neutralizantes do soro para SARS-CoV-2: lições sobre a infecção por SARS-CoV. J Microbiol Immunol Infect. https://doi.org/10.1016/j.jmii.2020.03.015

Vashist SK (2020) Ensaios de diagnóstico in vitro para COVID-19: avanços recentes e tendências emergentes. Diagnóstico 10: 202. https://doi.org/10.3390/diagnostics10040202

Zhou P, Lou YX, Wang XG et al (2020) Um surto de pneumonia associado a um novo coronavírus de provável origem em morcego. Nature 579: 270–273. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2012-7

Park TJ, Hyun MS, Lee HJ et al (2009) Um biossensor de ressonância de plasmon de superfície baseado em proteína de fusão automontada para diagnóstico rápido de síndrome respiratória aguda grave. Talanta 79: 295–301. https://doi.org/10.1016/j.talanta.2009.03.051

Park TJ, Lee S-K, Yoo SM et al (2011) Desenvolvimento de biossensor reflexivo usando a fabricação de nanocristais fotônicos funcionalizados. J Nanosci Nanotechnol 11: 632–637. https://doi.org/10.1166/jnn.2011.3269

Woo PCY, Lau SKP, Wong BHL et al (2004) Perfil longitudinal da imunoglobulina G (IgG), IgM e anticorpos IgA contra a proteína do nucleocapsídeo coronavírus da síndrome respiratória aguda grave (SARS) em pacientes com pneumonia devido ao coronavírus SARS. Clin Diagn Lab Immunol 11: 665–668. https://doi.org/10.1128/CDLI.11.4.665

Siracusano G, Pastori C, Lopalco L (2020) Respostas imunes humorais em pacientes com COVID-19: uma janela para o estado da arte. Front Immunol 11: 1049. https://doi.org/10.3389/fimmu.2020.01049

Zhang N, Wang L, Deng X et al (2020) Avanços recentes na detecção de infecção por vírus respiratório em humanos. J Med Virol 92: 408–417. https://doi.org/10.1002/jmv.25674

van der Hoek L (2007) Coronavírus humanos: o que eles causam? Antivir Ther 12: 651-658

Carlos WG, Dela Cruz CS, Cao B et al (2020) Novo coronavírus Wuhan (2019-nCoV). Am J Respir Crit Care Med 201: P7 – P8. https://doi.org/10.1164/rccm.2014P7

Lam CWK, Chan MHM, Wong CK (2004) Síndrome respiratória aguda grave: manifestações clínicas e laboratoriais. Clin Biochem Rev 25: 121-132

Wong TW (2006) ‘“ Will the SARS epidemic recur? ”’ Uma análise retrospectiva das opiniões dos especialistas. J Epidemiol Community Heal 60:87

Rabaan AA (2017) Coronavírus da síndrome respiratória do Oriente Médio: cinco anos depois. Expert Rev Respir Med 11: 901–912. https://doi.org/10.1080/17476348.2017.1367288

Hu B, Ge X, Wang L-F, Shi Z (2015) Bat origin of human coronaviruses. Virol J 12: 221. https://doi.org/10.1186/s12985-015-0422-1

Chan JF-W, Kok K-H, Zhu Z et al (2020) Caracterização genômica do novo coronavírus patogênico humano de 2019 isolado de um paciente com pneumonia atípica após visitar Wuhan. Emerg Microbes Infect 9: 221–236. https://doi.org/10.1080/22221751.2020.1719902

Lu H, Stratton CW, Wei Y (2020) The Wuhan SARS-CoV-2 — O que vem por aí para a China. J Med Virol 92: 546–547. https://doi.org/10.1002/jmv.25738

Kwong KCNK, Mehta PR, Shukla G, Mehta AR (2020) COVID-19, SARS e MERS: uma perspectiva neurológica. J Clin Neurosci. https://doi.org/10.1016/j.jocn.2020.04.124

Painel da Organização Mundial da Saúde (2020) WHO Coronavirus Disease (COVID-19). https://covid19.who.int/

Zheng J (2020) SARS-CoV-2: um coronavírus emergente que causa uma ameaça global. Int J Biol Sci 16: 1678–1685. https://doi.org/10.7150/ijbs.45053

Lu R, Zhao X, Li J et al (2020) Caracterização genômica e epidemiologia de novos coronavírus 2019: implicações para as origens do vírus e ligação ao receptor. Lancet 395: 565–574. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(20)30251-8

Wong HYF, Lam HYS, Fong AH-T et al (2020) Freqüência e distribuição dos achados radiográficos de tórax em pacientes COVID-19 positivos. Radiologia. https://doi.org/10.1148/radiol.2020201160

Kim S-H, Ko J-H, Park GE et al (2017) Apresentações atípicas da infecção por MERS-CoV em hospedeiros imunocomprometidos. J Infect Chemother 23: 769–773. https://doi.org/10.1016/j.jiac.2017.04.004

Zeng Q, Chen L, Cai X et al (2003) Radiografia de tórax e TC no diagnóstico de SARS. Chin J Radiol 37: 600-603

Zhu X, Wang X, Han L et al (2020) Amplificação isotérmica mediada por loop de transcrição reversa combinada com biossensor baseado em nanopartículas para diagnóstico de COVID-19. medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.17.20037796

Hirotsu Y, Mochizuki H, Omata M (2020) Double-Quencher Probes melhorou a sensibilidade de detecção de coronavírus 2 de síndrome respiratória aguda grave (SARS-CoV-2) por RT-PCR de uma etapa. medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.17.20037903

Qiu G, Gai Z, Tao Y et al (2020) Biossensores fototérmicos plasmônicos dual-funcionais para detecção de coronavírus 2 de síndrome respiratória aguda grave de alta precisão. ACS Nano. https://doi.org/10.1021/acsnano.0c02439

Diao B, Wen K, Chen J et al (2020) Diagnóstico de infecção por coronavírus 2 de síndrome respiratória aguda por detecção de proteína do nucleocapsídeo. medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.07.20032524

Layqah LA, Eissa S (2019) Um imunossensor eletroquímico para o vírus corona associado à síndrome respiratória do Oriente Médio usando uma matriz de eletrodos de carbono modificados com nanopartículas de ouro. Microchim Acta 186: 224. https://doi.org/10.1007/s00604-019-3345-5

Meyer B, Drosten C, Müller MA (2014) Ensaios sorológicos para coronavírus emergentes: desafios e armadilhas. Virus Res 194: 175–183. https://doi.org/10.1016/j.virusres.2014.03.018

Liu L, Liu W, Zheng Y et al (2020) Um estudo preliminar em ensaio sorológico para síndrome respiratória aguda grave coronavírus 2 (SARS-CoV-2) em 238 pacientes hospitalizados. medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.06.20031856

Cheng MS, Toh C-S (2013) Novel biosensing metodologies for ultrasensitive discovery of virus. Analyst 138: 6219–6229. https://doi.org/10.1039/C3AN01394D

Huang X, Wei F, Hu L et al (2020) Epidemiologia e características clínicas de COVID-19. Arch Iran Med 23: 268–271. https://doi.org/10.34172/aim.2020.09

Abbasi J (2020) A promessa e o perigo do teste de anticorpos para COVID-19. JAMA. https://doi.org/10.1001/jama.2020.6170

Ksiazek TG, Erdman D, Goldsmith CS et al (2003) Um novo coronavírus associado à síndrome respiratória aguda grave. N Engl J Med 348: 1953–1966. https://doi.org/10.1056/NEJMoa030781

Leung DTM, Tam FCH, Ma CH et al (2004) A resposta do anticorpo de pacientes com síndrome respiratória aguda grave (SARS) tem como alvo o nucleocapsídeo viral. J Infect Dis 190: 379–386. https://doi.org/10.1086/422040

Tan Y-J, Goh P-Y, Fielding BC et al (2004) Perfis de respostas de anticorpos contra proteínas recombinantes de coronavírus de síndrome respiratória aguda grave e seu uso potencial como marcadores de diagnóstico. Clin Diagn Lab Immunol 11: 362–371. https://doi.org/10.1128/CDLI.11.2.362

Wu H-S, Chiu S-C, Tseng T-C et al (2004) Métodos serológicos e biológicos moleculares para SARS-associados. Emerg Infect Dis 10: 304–310. https://doi.org/10.3201/eid1002.030731

Amanat F, Stadlbauer D, Strohmeier S et al (2020) Um ensaio sorológico para detectar a seroconversão da SARS-CoV-2 em humanos. medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.17.20037713

Khan S, Nakajima R, Jain A et al (2020) Análise de reatividade cruzada sorológica entre coronavírus humanos comuns e SARS-CoV-2 usando microarray de antígeno de coronavírus. bioRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.24.006544

Lin D, Liu L, Zhang M et al (2020) Avaliações de teste sorológico no diagnóstico de novas infecções por coronavírus (SARS-CoV-2) em 2019 durante o surto de COVID-19. medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.27.20045153

Zhang P, Gao Q, Wang T et al (2020) Avaliação de nucleocapsídeo recombinante e proteínas de pico para diagnóstico sorológico de nova doença por coronavírus 2019 (COVID-19). medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.17.20036954

Maache M, Komurian-Pradel F, Rajoharison A et al (2006) Resultados falso-positivos em um ensaio de western blot respiratório agudo grave recombinante foram retificados pelo uso de duas subunidades (S1 e S2) de pico para detecção de anticorpo para SARS- CoV. Clin Diagn Lab Immunol 13: 409–414. https://doi.org/10.1128/CVI.13.3.409

Xiang J, Yan M, Li H et al (2020) Avaliação de imunoensaio enzimático e kit de ensaio imunocromatográfico de ouro coloidal para detecção de novo coronavírus (SARS-Cov-2) causando um surto de pneumonia (COVID-19). medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.02.27.20028787

Hoy CFO, Kushiro K, Yamaoka Y et al (2019) Imunoensaio baseado em microfibra multiplex rápido para detecção de anticorpos anti-MERS-CoV. Sens Bio Sens Res. https://doi.org/10.1016/j.sbsr.2019.100304

Aydin S (2015) Uma breve história, princípios e tipos de ELISA, e nossa experiência de laboratório com análises de peptídeos / proteínas usando ELISA. Peptides 72: 4-15. https://doi.org/10.1016/j.peptides.2015.04.012

Wang Y-D, Li Y, Xu G-B et al (2004) Detecção de anticorpos contra SARS-CoV no soro de doadores infectados com SARS com ELISA e Western blot. Clin Immunol 113: 145-150. https://doi.org/10.1016/j.clim.2004.07.003

Carattoli A, Di BP, Grasso F et al (2005) ELISA baseado em proteína recombinante e ensaio imuno-citoquímico para o diagnóstico de SARS. J Med Virol 76: 137–142. https://doi.org/10.1002/jmv.20338

Woo PCY, Lau SKP, Wong BHL et al (2005) Sensibilidades diferenciais da síndrome respiratória aguda grave (SARS) ensaio imunossorvente ligado à enzima (ELISA) de polipeptídeo de pico de coronavírus e ELISA de proteína nucleocapsídeo de coronavírus SARS para sorodiagnóstico de pneumonia por coronavírus SARS. J Clin Microbiol 43: 3054–3058. https://doi.org/10.1128/JCM.43.7.3054

Fukushi S, Fukuma A, Kurosu T et al (2018) Caracterização de novos anticorpos monoclonais contra a proteína de pico do coronavírus MERS e sua aplicação na detecção de anticorpos independente da espécie por ELISA competitivo. J Virol Methods 251: 22–29. https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2017.10.008

Zhao J, Yuan Q, Wang H et al (2020) Respostas de anticorpos ao SARS-CoV-2 em pacientes com nova doença por coronavírus 2019. Clin Infect Dis. https://doi.org/10.1093/cid/ciaa344

González-Martínez MÁ, Puchades R, Maquieira Á (2018) Técnica imunoanalítica: ensaio imunoenzimático (ELISA). Técnicas modernas de autenticação de alimentos. Academic Press, Nova York, pp 617-657

García-González E, Aramendía M, Álvarez-Ballano D et al (2016) Amostra de soro contendo anticorpos endógenos que interferem com múltiplos imunoensaios hormonais. Estratégias de laboratório para detectar interferências. Pract Lab Med 4: 1-10. https://doi.org/10.1016/j.plabm.2015.11.001

Guan M, Chan KH, Peiris JSM et al (2004) Avaliação e validação de um ensaio imunoenzimático e um teste imunocromatográfico para diagnóstico sorológico de síndrome respiratória aguda grave. Clin Diagn Lab Immunol 11: 699–703. https://doi.org/10.1128/CDLI.11.4.699

Guan M, Chen HY, Foo SY et al (2004) Ensaio de imunoabsorção enzimática baseado em proteína recombinante e testes imunocromatográficos para detecção de anticorpos de imunoglobulina G para coronavírus da Síndrome Respiratória Aguda Grave (SARS) em pacientes com SARS. Clin Diagn Lab Immunol 11: 287–291. https://doi.org/10.1128/CDLI.11.2.287

Liu X, Shi Y, Li P et al (2004) Perfil de anticorpos para a proteína do nucleocapsídeo do coronavírus associado à síndrome respiratória aguda grave (SARS) em prováveis ​​pacientes com SARS. Clin Diagn Lab Immunol 11: 227–228. https://doi.org/10.1128/CDLI.11.1.227

Che X-Y, Qiu L-W, Liao Z-Y et al (2005) Antigenic cross-reactivity entre coronavírus associado à síndrome respiratória aguda grave e coronavírus humanos 229E e OC43. J Infect Dis 191: 2033–2037. https://doi.org/10.1086/430355

Smith-Norowitz TA, Kusonruksa M, Wong D et al (2012) Persistência de longo prazo de anticorpos IgE anti-vírus influenza A HIN1 no soro de crianças e adultos após vacinação contra influenza A com subsequente infecção H1N1: um estudo de caso. J Inflamm Res 5: 111-116. https://doi.org/10.2147/JIR.S34152

Martins-Gomes C, Silva AM (2018). Metodologias de Western blot para análise da expressão de proteínas in vitro induzida por agentes teratogênicos. Teste de teratogenicidade. Métodos em biologia molecular. Humana Press, Nova York, pp 191–203

Mahmood T, Yang P-C (2012) Western blot: técnica, teoria e solução de problemas. N Am J Med Sci 4: 429–434. https://doi.org/10.4103/1947-2714.100998

Qiu D, Tannock GA, Barry RD, Jackson DC (1992) Análise de Western blot de respostas de anticorpos às proteínas do virion da gripe. Immunol Cell Biol 70: 181–191. https://doi.org/10.1038/icb.1992.23

Castejon MJ, Yamashiro R, Oliveira CAF, Veras MASM (2017) Validação de desempenho de western blot para detecção de anticorpos anti-HIV em amostras de sangue coletadas em papel de filtro (DBS). J Bras Patol e Med Lab 53: 5-12. https://doi.org/10.5935/1676-2444.20170002

Kurien BT, Scofi RH (2015) Western blotting: uma introdução. Métodos em biologia molecular. Humana Press, Nova York, pp 17-30

He Q, Chong KH, Chng HH et al (2004) Desenvolvimento de um ensaio de western blot para detecção de anticorpos contra coronavírus causando síndrome respiratória aguda grave. Clin Diagn Lab Immunol 11: 417–422. https://doi.org/10.1128/CDLI.11.2.417

Wang Y, Chang Z, Ouyang J et al (2005) Perfis de anticorpos IgG para nucleocapsídeo e proteínas de pico do coronavírus associado à SARS em pacientes com SARS. DNA Cell Biol 24: 521–527. https://doi.org/10.1089/dna.2005.24.521

Guan M, Chen HY, Tan PH et al (2004) Uso de antígeno de lisado viral combinado com proteína recombinante em ensaio de imunotransferência ocidental como teste confirmatório para sorodiagnóstico de síndrome respiratória aguda grave. Clin Diagn Lab Immunol 11: 1148–1153. https://doi.org/10.1128/CDLI.11.6.1148

Odell ID, Cook D (2013) Técnicas de imunofluorescência. J Investig Dermatol 133: e4. https://doi.org/10.1038/jid.2012.455

Dilnessa T, Zeleke H (2017) Cultura de células, efeito citopático e diagnóstico de imunofluorescência de infecção viral. J Microbiol Mod Technol 2: 102

Bossuyt X, Cooreman S, De Baere H et al (2013) Detecção de anticorpos antinucleares por análise de imunofluorescência indireta automatizada. Clin Chim Acta 415: 101–106. https://doi.org/10.1016/j.cca.2012.09.021

Zhu H, Hu S, Jona G et al (2006) Diagnósticos de síndrome respiratória aguda severa usando um microarray de proteína de coronavírus. Proc Natl Acad Sci 103: 4011–4016. https://doi.org/10.1073/pnas.0510921103

Reusken C, Mou H, Godeke GJ et al (2013) Sorologia específica para coronavírus humanos emergentes por microarray de proteína. Eurosurveillance 18: 20441. https://doi.org/10.2807/1560-7917.ES2013.18.14.20441

Chan PKS, Ng K-C, Chan RCW et al (2004) Ensaio de imunofluorescência para diagnóstico sorológico de SARS. Emerg Infect Dis 10: 530–532. https://doi.org/10.3201/eid1003.030493

Manopo I, Lu L, He Q et al (2005) Avaliação de um ensaio de imunofluorescência baseado em proteína Spike seguro e sensível para a detecção de respostas de anticorpos ao SARS-CoV. J Immunol Methods 296: 37–44. https://doi.org/10.1016/j.jim.2004.10.012

Koczula KM, Gallotta A (2016) Lateral flow assays. Essays Biochem 60: 111-120. https://doi.org/10.1042/EBC20150012

Wong RC, Tse HY (2008) Lateral flow immunoassay. Humana Press, Nova York

Bahadır EB, Sezgintürk MK (2016) Ensaios de fluxo lateral: princípios, designs e rótulos. Trends Anal Chem 82: 286–306. https://doi.org/10.1016/j.trac.2016.06.006

Zhao L, Sun L, Chu X (2009) Chemiluminescence immunoassay. Trends Anal Chem 28: 404–415. https://doi.org/10.1016/j.trac.2008.12.006

Cai X-F, Chen J, Hu J-L et al (2020) Um imunoensaio enzimático de quimioluminescência magnética à base de peptídeo para diagnóstico sorológico da doença do vírus corona 2019 (COVID-19). J Infect Dis. https://doi.org/10.1101/2020.02.22.20026617

Qu J, Wu C, Li X et al (2020) Perfil de anticorpos IgG e IgM contra síndrome respiratória aguda grave coronavírus 2 (SARS-CoV-2). Clin Infect Dis. https://doi.org/10.1093/cid/ciaa489

Turner APF (2013) Biossensores: sentido e sensibilidade. Chem Soc Rev 42: 3184–3196. https://doi.org/10.1039/c3cs35528d

Caygill RL, Blair GE, Millner PA (2010) Uma revisão sobre biossensores virais para detectar patógenos humanos. Anal Chim Acta 681: 8-15. https://doi.org/10.1016/j.aca.2010.09.038

Lakshmipriya T, Gopinath SCB (2019) Uma introdução a biossensores e biomoléculas. Em Nanobiossensores para direcionamento biomolecular. Elsevier, Nova York, pp 1-21

Hsueh P-R, Hsiao C-H, Yeh S-H et al (2003) Características microbiológicas, respostas sorológicas e manifestações clínicas na síndrome respiratória aguda grave, Taiwan. Emerg Infect Dis 9: 1163–1167. https://doi.org/10.3201/eid0909.030367

Peiris JSM, Lai ST, Poon LLM et al (2003) Coronavirus como uma possível causa da síndrome respiratória aguda grave. Lancet 361: 1319–1325. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(03)13077-2

Shi Y, Yi Y, Li P et al (2003) Diagnóstico da síndrome respiratória aguda grave (SARS) pela detecção de anticorpos do nucleocapsídeo do coronavírus SARS em um ensaio imunoenzimático de captura de antígeno. J Clin Microbiol 41: 5781–5782. https://doi.org/10.1128/JCM.41.12.5781

Okba NMA, Müller MA, Li W et al (2020) SARS-CoV-2 specific anticorpos responses in COVID-19 patients. Emerg Infect Dis. https://doi.org/10.1101/2020.03.18.20038059

Perera RAPM, Mok CKP, Tsang OTY et al (2020) Ensaios serológicos para síndrome respiratória aguda grave coronavírus 2 (SARS-CoV-2), março de 2020. Eurosurveillance 25: 2000421. https://doi.org/10.2807/1560-7917

EUROIMMUN AG (2020) Anti-SARS-CoV-2 ELISA (IgG) Instrução de uso

InBios International Inc. (2020) Instruções de uso do InBios SCoV-2 Detect TM IgG ELISA

Beijing Wantai Biological Pharmacy Enterprise Co. Ltd. (2020) WANTAI SARS-CoV-2 Ab ELISA

Bio-Rad Laboratories Inc. (2020) Platelia SARS-CoV-2 Total Ab

Shanghai Fosun Long March Medical Science Co. (2020) Relatório de avaliação de teste de sorologia para "Fosun COVID-19 IgG / IgM Rapid Antibody Detection Kit" de Shanghai Fosun Long March Medical Science Co., Ltd.


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